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Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷酯酰絲氨酸（phosphatidylserine，簡稱PS）的一種細胞凋亡檢測試劑盒?？梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光 檢測設(shè)備進行檢測。

檢測原理

凋亡早期，細胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）會從膜內(nèi)翻到膜外，這是凋亡的一個典型特征，細胞凋亡處于早期階段時，僅有PS外翻，而細胞膜仍然完整，隨著凋亡進程的推移，細胞除了PS外翻以外，細胞膜通透性會改變，可以簡單的理解成凋亡后期，細胞膜有穿孔的現(xiàn)象。

Annexin V凋亡檢測試劑盒一般包含3個組分：兩個染料和一個為Annexin V標記提供鈣離子環(huán)境的Binding Buffer。Annexin V本質(zhì)是一個在鈣離子環(huán)境下，能夠與磷脂酰絲氨酸高度特異性結(jié)合的膜聯(lián)蛋白，通過在該蛋白上標記的熒光基團，來標記凋亡細胞，然后再搭配只能夠進入受損細胞膜的核酸染料，就可以達到區(qū)分各階段細胞的目的了。

細胞分為三類：一是無PS外翻，也沒有細胞膜破裂的健康細胞（兩個染料都染不上），二是處于早期凋亡，有PS外翻但是細胞膜完好的細胞（可以染上Annexin V-FITC，不能染上PI），三是處于晚期凋亡階段，既存在PS外翻，也存在細胞膜破裂的晚期凋亡細胞（兩種染料均可染上）。染完色后通過流式細胞儀，就能夠?qū)毎后w進行定量和分析了。

Bioss Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒介紹

產(chǎn)品特點

Bioss自主研發(fā)產(chǎn)品，染色效果優(yōu)于國際高價格品牌！
       調(diào)亡細胞群分群清晰，且細胞群集中！
       不同檢測方案，信號更強更靈敏！
       操作簡便，省時又省力，加入PI 后5min可直接上機檢測！

BA00101檢測數(shù)據(jù)

A. 流式細胞儀分析：

AF488最大激發(fā)波長為488nm，最大發(fā)射波長519nm；PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長為 535nm， 最大發(fā)射波長為615nm。用CellQuest等軟件進行分析，繪制散點圖，AF488為橫坐標，PI為縱坐標。典型實驗中的細胞可以分成三個亞群，活細胞僅有很低強度的自發(fā)熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色及紅色熒光雙重染色。

B. 熒光顯微鏡分析：

懸浮細胞：滴一滴用 AnnexinV-AF488/PI 雙染的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞。

貼壁細胞：可直接用蓋玻片培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡。

在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。早期凋亡細胞僅有綠色熒光信號，晚期凋亡細胞有綠色及紅色熒光雙重染色。

Annexin V單染(左)、PI單染(中)、Annexin V/PI雙染(右)

Bioss產(chǎn)品與國際品牌檢測結(jié)果對比示例

Protocol:

Jurkat 細胞生長至對數(shù)生長期時，分別經(jīng)過紫外誘導0秒、15秒、30秒后，繼續(xù)培養(yǎng)4h后加入Annexin V-FITC / PI檢測。

Result：

Bioss

e品牌

k品牌

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